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高中生很牛B--自己做大学生物实验

来源:51海口家教网    点击:2364    发布日期:2008-12-10 12:39:34
实验 果蝇唾腺染色体标本的制备与观察
 
实验目的
    通过实验掌握果蝇唾腺染色体的制片方法,了解果蝇唾腺染色体的形态结构特点并练习解剖果蝇幼虫的技术。
实验原理
唾腺染色体是一类存在于双翅目昆虫的幼虫唾液腺内的巨大染色体。果蝇的唾腺染色体是典型的巨大染色体,它的巨大性的成因是核内有丝分裂造成的。由于其染色体DNA经过多次复制(可达210215次),但并未发生细胞核分裂,同时唾腺细胞中的染色体总是处在配对状态即体细胞联会,重复复制后的染色体聚集在一起,所以在显微镜下看到唾腺染色体要比一般的染色体大得多,又称多线染色体。
实验材料
普通果蝇的三龄幼虫、生理盐水
实验用具和试剂
双筒解剖镜、显微镜、解剖针
改良苯酚品红溶液、IMHCI
1. 幼虫的培养
为了在解剖镜下便于操作,使用的幼虫应发育充分而且个体较大。在实验中,人们通常采用两个措施控制幼虫的生长。
1)良好的培养基提供了果蝇生长发育的必需营养,因此在培养瓶内放置的亲本不易过多,否则将产生过多的卵而造成养分不足。
2)培养果蝇的环境温度应比正常培养时略低一些,一般可控制在1620℃范围内,低温下生长的果蝇个体较大。果蝇属于完全变态的昆虫,成虫交尾后将卵产在培养基内。在适宜的温度下,卵发育为幼虫并经过一、二龄幼虫的发育后,三龄幼虫要爬到瓶壁上化蛹,为了能够在实验时获得较多的幼虫,可以分批将亲本放入培养瓶。实验时从培养瓶的瓶壁上挑选那些发育良好的、个体较大的幼虫。
2. 剖取唾腺
用解剖针从培养瓶内挑取1只三龄幼虫置于载片上,并滴加1滴生理盐水。将载片放在载物台上,用解剖镜进行观察。首先将幼虫的头尾分清,果蝇的头部有一黑点(口器),头部不断作伸缩状。解剖时,双手各持一个解剖针,一支针先压在幼虫身体的前1/3处,另一支针压住果蝇头部并向前轻轻移动,即可将头部与身体拉开,仔细观察可看见一对透明做白的囊状体即为唾腺。在唾腺前端各伸出一条细管在前面汇合成一总管。果蝇的唾腺是单层细胞构成的,因此在解剖镜下可以看出其细胞界限。如果唾腺没有被拉出来,可用解剖针轻压虫体的断开处,把唾腺挤压出来。操作时解剖针一定要轻轻拨动,切不可将肠管、神经管等全部截断从而影响视线。由于果蝇唾腺几乎透明,但是其上连带的脂肪体为乳白色,因此还是容易辨认出来的。
3. 去除脂肪体
果蝇的唾腺上附有乳白色的脂肪体,如不去除,在制片时会在载片上形成大量脂肪滴,从而影响制片的质量。在去除脂肪体时,用解剖针的针尖轻轻操作,尽量保持唾腺的完整性。如果在剥离脂肪时将唾腺碰断,仍然可以继续进行染色操作,因为在唾腺内有大量的细胞。
4. 酸解
用解剖针将载片上的杂物全部去除,只留下唾腺。如果唾腺周围还有许多水分,应用吸水纸小心将水分洗净,注意要在解剖镜下操作,并要避免将剥离好的唾腺用纸吸走。用IMHCI酸解10min,再用蒸馏水洗2次。
5. 染色及压片
加一滴改良苯酚品红染液染色1015min。盖上盖玻片并覆盖一层吸水纸,用左手稳住载玻片,防止载玻片与盖玻片滑动,右手持解剖针,用针柄敲击盖片。用力要合适,将唾腺细胞压破,使染色体伸展开但又没造成染色体的断裂或重叠为最好。
6. 镜检
作业
1)什么是染色中心?
2)利用巨大染色体可以进行哪些遗传学研究
3)制作果蝇唾腺染色体最关键的步骤是什么?
4)绘果蝇唾腺染色体图。





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